|
plastic
mieloblast
| Dołączył: 13 Paź 2008 |
| Posty: 5 |
Przeczytał: 0 tematów
|
|
Płeć: Mężczyzna |
|
|
 Wysłany: Pią 19:37, 28 Sie 2009 |
|
 |
|
|
|
Procedura opiera się na wykorzystaniu firmowego kitu do identyfikacji ludzkiego DNA. Profil DNA ustala się na podstawie polimorfizmów STR oraz markera płci. Zestaw zawiera mix primerów do reakcji PCR, gdzie jeden z pary primerów jest wyznakowany znacznikiem fluorescencyjnym (jednym z 3 lub 4 różnych znaczników). Dzięki kombinacji wielu primerów z różnymi znacznikami, w jednej reakcji multipleksowej można przeprowadzić amplifikację a potem detekcję do 15 układów STR + amelogenina (marker płci). Zamplifikowane i wyznakowane fragmenty poddaje się analizie wielkości (elektroforeza kapilarna na sekwenatorze) przy zastosowaniu wewnętrznego standardu wielkości oraz równolegle analizowanego tzw. allelic laddera, czyli markera odniesienia, który zawiera prawie wszystkie występujące w populacji allele STR. Określając na tej podstawie wielkość zamplifikowanego fragmentu, liczoną jako wielokrotność powtórzeń sekwencji 4- czy 5-nukleotydowych, otrzymujemy wynik liczbowy dla każdego z loci STR (tzw. profil genetyczny), co jest już ostatecznym wynikiem identyfikacji. Pozostaje teraz porównać próbę dziecka i ojca i sprawdzić czy mają przynajmniej jeden wspólny allel (tyle samo powtórzeń Short Tandem Repeats) w badanym locus. Dodatkowe obliczenia statystyczne (oparte na częstościach alleli w populacji), pozwalają na procentowe określenie prawdopodobieństwa ojcostwa - zwykle są to liczby rzędu 99,9999%
|
|
|
